pcr产物的分离纯化

PCR产物分离纯化有多种实用方法。凝胶电泳结合DNA回收试剂盒操作简单，琼脂糖凝胶能清晰分离不同大小片段，切下目标条带后，硅胶膜技术高效吸附DNA，洗脱得到高纯度产物。磁珠纯化法无需离心，磁珠结合DNA后用磁力分离，洗涤步骤少，产物回收率可达85%以上，特别适合高通量实验。离子交换柱纯化利用电荷差异分离，DNA与柱材结合后，高盐溶液洗脱，纯化产物无盐离子残留，可直接用于酶切或连接反应。

PCR产物纯化后质量直接影响下游实验。乙醇沉淀法成本低，2.5倍体积乙醇和1/10体积醋酸钠混合，-20℃沉淀过夜，离心后70%乙醇洗涤，干燥后重悬，纯度高但耗时较长。旋转柱纯化是目前主流方法，样品上柱后离心，结合膜截留杂质，低盐缓冲液洗脱，整个过程15分钟内完成，产物浓度适合后续克隆。自动化纯化系统整合磁珠或柱技术，一次处理96个样品，重复性好，大大提高了实验效率。