pcr需要的温度

PCR实验需要精确控制三种温度。变性阶段温度为94-98℃，使DNA双链解开成单链。退火温度根据引物设计在50-65℃之间，引物与模板DNA结合。延伸温度在72℃左右，DNA聚合酶合成新链。整个过程需要20-30个循环，每个循环经历这三个温度变化。

PCR仪的温度控制精度至关重要。现代设备能精确到±0.1℃，确保反应特异性。高温变性时间短，约15-30秒。退火时间20-40秒，延伸时间根据产物长度确定，1分钟可合成1000个碱基。反应结束后，产物需保持在4-10℃保存。温度波动会影响扩增效率和特异性，实验前必须校准设备。