pcr中延伸的方向

PCR延伸阶段是DNA聚合酶沿着模板链合成互补新链的过程。延伸方向始终是5'到3'端，这是DNA聚合酶的固有特性。反应温度设定在72°C左右，这个温度能让酶保持最佳活性。延伸时间根据目标片段长度决定，每1000个碱基需要约1分钟。新链合成方向与模板链阅读方向相反，一条链连续合成，另一条链不连续合成。延伸过程中，dNTPs被添加到 growing chain的3'端，释放焦磷酸分子。

延伸阶段需要考虑退火温度与延伸温度的平衡。延伸时间过长会导致非特异性产物增加，过短则目标片段合成不完全。现代热稳定DNA聚合酶具有"读通"能力，能穿过某些模板二级结构。延伸速率因酶种类而异，范围约20-100个碱基/秒。缓冲液中镁离子浓度对延伸效率至关重要，最佳浓度在1.5-3.0毫摩尔之间。延伸结束后，产物可直接用于下游应用或进入下一个循环。