pcr扩增几次能得到目的基因序列

PCR扩增次数取决于模板DNA质量和目标片段长度。标准PCR程序设置25-35个循环，每次循环包含变性、退火和延伸三步。模板浓度高时，25个循环足以获得清晰条带；浓度低则需要35个循环。30μL反应体系中，初始模板量100ng时，30循环可扩增出10^9拷贝的目的基因。琼脂糖凝胶电泳可直观判断扩增结果，单一明亮条带表明成功获得目标序列。

不同PCR类型所需循环次数各异。长片段PCR需要45-50个循环，高保真PCR建议30-35个循环以减少错误。巢式PCR分两步进行，首轮25-30个循环，第二轮15-20个循环。实时PCR检测Ct值，Ct值低于20表明模板丰富，只需25个循环即可获得足够产物。多重PCR受限于引物数量，一般设置20-25个循环避免非特异性扩增。