亲和层析分离的过程

亲和层析分离利用生物分子特异性结合原理实现高效纯化。样品通过填充有固定配体的层析柱时，目标分子与配体特异性结合，杂质直接流出。改变缓冲液条件后，目标分子从配体上解离收集。整个过程只需2-3步操作，回收率可达80-95%，特别适合纯化酶、抗体和核酸等生物大分子。纯化倍数提高100-1000倍，纯度超过95%，广泛应用于生物制药和基因工程领域。

亲和层析分离的关键在于选择合适的配体和层析介质。常用的琼脂糖微球直径45-165微米，具有大孔结构和高结合容量。镍离子亲和层析专门纯化带His标签的蛋白质，谷胱甘肽-Sepharose用于GST融合蛋白分离。整个过程耗时2-6小时，上样量控制在柱床体积5-10%效果最佳。洗脱方式包括pH改变、竞争性洗脱和特异性洗脱三种，可根据目标分子性质灵活选择。