荧光定量pcr的基本原理

荧光定量PCR通过荧光信号积累实时监测DNA扩增过程。反应体系中包含荧光染料或探针，随着PCR循环进行，目标DNA片段呈指数级增长，荧光信号同步增强。仪器检测荧光强度变化，根据Ct值（循环阈值）确定初始模板量。这种方法将传统PCR的终点检测变为实时监测，灵敏度极高，可检测到单拷贝基因。常见应用包括病原体检测、基因表达分析和食品安全监测等领域。

荧光定量PCR利用荧光报告系统实现定量分析。SYBR Green染料能嵌入双链DNA，发出荧光；TaqMan探针则含荧光基团和淬灭基团，扩增时两者分离产生信号。反应结束后，仪器通过标准曲线计算样本中目标DNA起始量。该方法重复性好，同一模板多次实验结果差异小。自动化程度高，一次可处理96个以上样本，广泛应用于医学诊断、药物研发和环境监测等多个领域。