时间:09-15人气:11作者:夜残殇
PCR扩增效率与模板浓度密切相关。浓度过低会导致扩增失败,浓度过高则会引起非特异性扩增或抑制反应。实验室实践中,DNA浓度在10-100纳克/微升范围内效果最佳,浓度低于1纳克/微升时扩增信号弱,高于500纳克/微升时抑制现象明显。不同PCR体系对浓度要求各异,SYBR Green检测体系比TaqMan探针体系对浓度变化更敏感。浓度优化是PCR实验成功的关键步骤之一。
PCR反应中的引物浓度同样影响扩增效果。引物浓度过高会导致引物二聚体形成,浓度过低则扩增效率下降。标准反应体系中引物浓度一般为0.1-0.5微摩尔,低于0.05微摩尔时扩增信号弱,高于1微摩尔时非特异性产物增加。Mg²⁺浓度变化也会影响PCR结果,最佳浓度通常在1.5-2.5毫摩尔之间,浓度变化0.5毫摩尔就能显著改变扩增效果。
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