时间:09-16人气:22作者:挥笔洒天下
PCR技术需要的核心原料包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液。DNA模板提供扩增的目标序列,引物决定扩增区域,DNA聚合酶负责合成新链,dNTPs提供 building blocks,缓冲液维持最佳反应环境。完整反应体系还需加入Mg2+离子和稳定剂。实验室中使用的原料有不同规格和纯度要求,高纯度原料能减少抑制物影响,提高扩增效率。
PCR原料质量直接影响实验结果。优质DNA聚合酶具有高保真度和热稳定性,能在高温下保持活性。引物设计长度通常为18-22个核苷酸,Tm值接近60°C。缓冲液成分优化后可增强特异性,减少非特异扩增。dNTPs浓度平衡至关重要,过高会导致错误掺入,过低则影响产量。完整反应体系体积一般在20-50微升之间,原料比例需要精确计算。
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