pcr扩增几次能获得目的基因

PCR扩增获得目的基因一般需要25-35个循环。每个循环包含变性、退火和延伸三个步骤，每一步骤精确控制温度和时间。第1-10个循环主要增加模板DNA数量，第11-25个循环指数扩增期，产物量呈几何级数增长。第26-35个循环进入平台期，产物量趋于稳定。实际操作中，30个循环足以获得微克级别的目的基因片段。

PCR循环次数取决于模板DNA初始量。起始模板为100纳克时，25个循环可产生足够产物；起始模板仅为10皮克时，需要35个循环才能获得相同产量。实验中可设置不同循环次数梯度(20、25、30、35次)进行对比，通过琼脂糖凝胶电泳检测条带亮度确定最佳循环数。过多循环会增加非特异性产物风险，过少则导致产量不足。