土壤水解酶测定方法

土壤水解酶测定方法采用分光光度法，通过测量底物水解产物浓度变化来评估酶活性。实验室常用4-硝基苯酚标记底物，如4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷，37℃培养1小时后加入NaOH终止反应，410nm测定吸光度。该方法灵敏度高，可检测到0.01μmol/g土壤的酶活性。荧光底物法更为灵敏，使用4-甲基伞形酮标记底物，在365nm激发光下测定荧光强度，检测限可达0.001μmol/g。

微孔板技术提高了测定效率，96孔板可同时处理40个样品。土壤悬浮液与底物溶液混合后，酶促反应在30℃恒温培养箱中进行30分钟。自动酶标仪可同时读取吸光度或荧光值，大幅提高通量。微孔板法减少了试剂用量，每孔仅需200μL反应体系。该方法适用于大规模土壤样品分析，可在4小时内完成96个样品的测定。