革兰氏染色的操作步骤

革兰氏染色分四步完成。涂片标本经结晶紫初染1分钟，碘液媒染1分钟形成复合物。酒精脱色时间控制在10-30秒，革兰氏阳性菌保留紫色，阴性菌变为无色。最后用番红复染1分钟，阳性菌仍呈紫色，阴性菌则显示红色。整个过程需在洁净载玻片上进行，每步后充分水洗。实验温度控制在20-25℃，避免过高温度影响结果准确性。

染色成功的关键在于严格控制各步骤时间。酒精脱色时间过长会导致假阴性结果，过短则出现假阳性。染色液需新鲜配制，结晶紫浓度0.5%，碘液浓度1%，酒精浓度70%。标本厚度要适中，过厚影响染色效果，过薄则细菌数量不足。每批实验应设置阳性对照和阴性对照，确保染色系统正常工作。实验室建议每周进行质量控制检查。