pcr分子基础是什么

PCR技术建立在DNA双链解旋和引物特异性结合的基础上。高温使DNA双链分开，温度降至55-65度时，引物与目标序列互补配对。DNA聚合酶从引物开始，沿模板链延伸合成新链。整个过程需要dNTPs提供原料，Mg2+作为辅助因子。每个循环产物数量呈指数增长，30个循环后，目标片段可扩增上百万倍。PCR反应体系包含模板DNA、引物、Taq酶、缓冲液和四种脱氧核苷酸。

PCR技术依赖DNA聚合酶的5'到3'合成活性。Taq酶耐高温特性使反应无需每次添加新酶。退火温度由引物Tm值决定，影响特异性。延伸时间取决于产物长度，每分钟可合成约1000个碱基。PCR产物长度由引物间距决定，常见100-1000bp。荧光定量PCR通过SYBR Green染料或探针监测扩增过程，实现实时定量检测。PCR技术广泛应用于基因克隆、突变检测和病原体诊断等领域。